Los cuatro protagonistas de «Mutant Mayhem» son Micah Abbey (Donatello), Shamon Brown, Jr. (Michelangelo), Nicolas Cantu (Leonardo) y Brady Noon (Raphael). De los cuatro, solo Noon, de 19 años, ha tenido una notable carrera como actor antes de esto, habiendo aparecido en la mayor parte de «Boardwalk Empire», así como en los largometrajes «Good Boys», «Marry Me» y como el personaje principal en las dos películas animadas «Diary of a Wimpy Kid». Las cuatro tortugas ninja son hermanos y, como tales, requieren un cierto tipo de antagonismo fraternal que cualquier persona con varios hermanos podría reconocer. Se aman, pero no siempre se llevan bien.
Rogen señala que en cada iteración de «Teenage Mutant Ninja Turtles», casi todos los actores que los interpretaban eran adultos. Entonces, quería finalmente concentrarse en la parte «adolescente» del título y elegir a niños reales para los papeles; el elenco actual tiene entre 15 y 19 años. Abbey notó que cada escena requería que él y sus tres coprotagonistas estuvieran en la habitación al mismo tiempo. Además, sus movimientos fueron filmados, dando a los animadores una base física sobre la cual formar las actuaciones animadas de los personajes. El codirector Jeff Rowe dijo en el video que le gustaba la idea de que los cuatro personajes hablaran entre sí, lo cual es muy poco común en la animación; por lo general, las líneas se separan en aras de la claridad. «¡Estaba mucho más vivo!», dijo Rogen.
Brown se jactó de que él y sus coprotagonistas improvisaron gran parte de su diálogo, un pensamiento respaldado por Rogen, a quien le encantaba escuchar los insultos orgánicos e incómodos que el elenco se lanzaba entre sí mientras interpretaban el personaje.
Cantu notó que los directores no les dijeron cómo ser adolescentes. Simplemente se les permitió ser adolescentes.